ენტერობაქტერიების და ზოგიერთი ვიბრიოს დიფერენციალურ განსაზღვრაში განსაკუთრებული ადგილი უჭირავს ვოგეს-პროსკაუერის რეაქციას. ტესტი ეფუძნება ბაქტერიების უნარს გლუკოზის დუღილის აცეტოინის წარმოქმნით.
კვლევის პროცესის არსი
მიკრობიოლოგიაში ვოგეს-პროსკაუერის რეაქცია ხშირად გამოიყენება ენტერობაქტერიების იერსინიას ოჯახის (მათ შორის ფსევდოტუბერკულოზისა და ენტეროკოლიტის პათოგენების), ეშერიხია კოლისა და სპორების წარმომქმნელი აერობების დიფერენცირებისთვის. შედეგი ვიზუალიზდება საშუალების შეღებვით, როდესაც გარკვეული რეაგენტები დაემატება.
ეს ტესტი ეკუთვნის IMViC სერიებს (აბრევიატურა Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - საიდენტიფიკაციო ტესტების ჯგუფი დიფერენციალური განმარტებების ჩათვლით:
- ინდოლით, ტრიპტოფანის ინდოლად დაშლის საფუძველზე, გამოყენებული კოვაქსის ან ერლიხის რეაგენტის თანდასწრებით;
- გამოყენებამეთილროტი, ან მეთილის წითელი, რომელიც განსაზღვრავს მოცემულ pH-ს გლუკოზის მეტაბოლიზაციის შედეგად;
- ვოგეს-პროსკაუერის რეაქციები აცეტილ-მეთილკარბინოლის გამოსავლენად;
- ციტრატის გამოყენება ფერის ცვლილებით გარემოს ალკალიზაციის შედეგად.
პროცესის არსი არის დიაგნოზირებული ბაქტერიების არსებობის ვიზუალიზაცია მათ მიერ წარმოქმნილი აცეტინის ურთიერთქმედების გამო ჟანგბადის თანდასწრებით კაუსტიურ პოტაშთან. აცეტილ-მეთილკარბინოლი იჟანგება დიაცეტილში, რომელიც ქმნის ნათელ წითელ ან ვარდისფერ ნაერთს. გაზარდეთ ტესტის მგრძნობელობა ალფა-ნაფთოლის შეყვანით კაუსტიკური კალიუმის დამატებამდე.
ტესტის პარამეტრი
ვოგეს-პროსკაუერის რეაქციის ფორმულირება გულისხმობს მიკროორგანიზმების წინასწარ გაშენებას. კლარკის დიფერენციალურ სადიაგნოსტიკო გარემოზე ითესება სუფთა კულტურა, რომლის ვარიაციაა კლარკის ბულიონი (აგარ-აგარის დამატების გარეშე). გამოიყენება ან მზა საშუალება, ან მზადდება დამოუკიდებლად. შემადგენლობაში შედის:
- 5გ პეპტონი;
- 5გ გლუკოზა;
- 5გ ორბაზისური კალიუმის ფოსფატი;
- 1ლ დისტილატი.
კვლევის დროს, კულტურა ინოკულირებულია სტერილური ბაქტერიოლოგიური მარყუჟით თხევად გარემოში. რაოდენობა - 5 მლ სინჯარაში პლუს კონტროლი. ინკუბაცია ტარდება 35-37 გრადუს ტემპერატურაზე ორი დღის განმავლობაში. შემდეგი, ვოგეს-პროსკაუერის რეაქციის შესწავლა ტარდება ეტაპად:
- 2, 5 მლ ბულიონის კულტურა გადადის სტერილურ ტუბში.
- დაამატეთ ექვსი წვეთი ალფა-ნაფთოლი (5% ალკოჰოლის ხსნარი).
- დაამატე 40%კაუსტიკური კალიუმის ხსნარი 0,1 მლ ოდენობით, ან ორი წვეთი.
- შერევა ხდება სინჯარის ნაზად შერხევით.
- შეაფასეთ შედეგი ექსპერიმენტის დაწყებიდან 15 წუთის შემდეგ.
ალტერნატიული ტესტის მეთოდია ღამის ინკუბაცია, რომლის დრო მცირდება 18 საათამდე ან დღეში. ამ მეთოდის გარდა, გამოიყენება ექსპრეს ტესტიც: კულტურა შეჰყავთ მარყუჟში 2 მლ გარემოში, ინკუბირებულია დაახლოებით ოთხი საათის განმავლობაში, შემდეგ უმატებენ რეაგენტებს თანაბარი რაოდენობით 2-3 წვეთი, ურევენ და შედეგი ფასდება ათი წუთის შემდეგ.
კონტროლი არის პნევმონიის ერთ-ერთი გამომწვევი აგენტი Klebsiella pneumoniae - შტამი atcc 13883.
შედეგის შეფასება
რეაგენტების დამატების შემდეგ საჭირო დროის გასვლის შემდეგ (5-დან 15 წუთამდე) უნდა დაფიქსირდეს ალუბლის-წითელი შეფერილობა გამოხატული დადებითი რეაქციით, წითელი და ვარდისფერი - სუსტი დადებითი რეაქციით. არანაირი ცვლილება არ ფიქსირდება როგორც უარყოფითი შედეგი.
ხსნარში კაუსტიკური კალიუმის ჭარბი რაოდენობა შეიძლება გამოიწვიოს დადებითი რეაქციის იმიტაცია, შეღებვა სპილენძის ფერში. ამ შემთხვევაში უნდა ჩაიწეროს ტესტირებადი კოლონიის უარყოფითი პასუხი. ასევე, სპილენძის შეღებვა ჩნდება იმ შემთხვევებში, როდესაც შეფასება ხდება რეაგენტების შეყვანიდან ერთი საათის შემდეგ.
შედეგის შეფასებისას გასათვალისწინებელია, რომ შესწავლილი მიკროორგანიზმების ხანგრძლივი კულტივაცია (სამ დღეზე მეტი) იწვევს გარემოს დამჟავებას, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს კვლევის არასწორი შედეგი. რეაქცია შეიძლება იყოს რბილად დადებითი ანცრუ უარყოფითი.
მოთხოვნები სატესტო რეაგენტებისთვის
Voges-Proskauer რეაგენტები უნდა აკმაყოფილებდეს ისეთ მოთხოვნებს, როგორიცაა სწორი კონცენტრაცია, მაღალი სისუფთავე და სტაბილურობა, რაც მიიღწევა სათანადო შენახვის გზით.
გამოყენებისთვის მზა სატესტო კომპლექტები, როგორც წესი, შეიცავს რეაგენტებს 100 ან მეტი გამოყენებისთვის და გამოდის პლასტმასის ან შეღებილი მინის ფლაკონებში. ხარისხი რეგულირდება შესაბამისი დოკუმენტაციით.
