ბაქტერიული ინფექციების მრავალფეროვნება მოითხოვს პათოგენის მკაფიო იდენტიფიკაციას და მისი სახეობების განსაზღვრას. მიკროორგანიზმის ტიპის განსაზღვრაში მიკრობიოლოგებს ეხმარება მისი ტინქტური თვისებები - მიკრობის მგრძნობელობა სხვადასხვა საღებავით შეღებვისადმი. ეს მეთოდი საშუალებას გაძლევთ შეისწავლოთ პათოგენის მორფოლოგია. ბაქტერიების ტინქტურ თვისებებს დიდი მნიშვნელობა აქვს მიკრობიოლოგიის სფეროში პრაქტიკული და თეორიული კვლევისთვის.
მიკრობული კვლევა
ბაქტერიოლოგიაში მიკროორგანიზმების შეღებვის მრავალი მეთოდი არსებობს. ყველა მათგანი დაფუძნებულია ბაქტერიების ტინქტურ თვისებებზე. შეღებვა საშუალებას გაძლევთ განსაზღვროთ მათი ფორმა, სტრუქტურა, ზომა, შედარებითი პოზიცია. ეს საშუალებას იძლევა გადაჭრას ზოგადი ბიოლოგიის და შედარებითი მიკრობიოლოგიის მიკროორგანიზმების ტიპების სისტემატიზაციის პრობლემები.
რატომ დახატე ისინი
ბაქტერიები პრაქტიკულადგამჭვირვალე ორგანიზმები და შეღებვის გარეშე, ისინი ცუდად ჩანს ჩვეულებრივი მიკროსკოპისთვის. ობიექტების შესასწავლად შეგიძლიათ გამოიყენოთ სპეციალური ტიპის მიკროსკოპია (ფაზა კონტრასტი, მუქი ველი), მაგრამ ყველაზე მარტივი გზაა შეღებვა, რის შემდეგაც ბაქტერიები ხილული ხდება ჩვეულებრივი სინათლის მიკროსკოპით.
ნიმუშის მომზადება
მიუხედავად გამოყენებული შეღებვის ტექნიკისა, არსებობს შესასწავლი ობიექტის მომზადების ერთიანი წესები. შემდეგი ეტაპები სავალდებულოა:
- სტერილური ხელსაწყოები ასუფთავებენ შუშის სლაიდს.
- ნიმუში შრება. ეს კეთდება ოთახის ტემპერატურაზე ან საშრობი კარადების გამოყენებით.
- მოჰყვება ფიქსაციის ეტაპი - მიკროორგანიზმები მიმაგრებულია მინაზე სპეციალური ნაერთებით.
- სწორი შეღებვა - ნიმუში იფარება საღებავით გარკვეული პერიოდის განმავლობაში, რის შემდეგაც იგი ირეცხება.
- საბოლოო გაშრობა - ნიმუში კვლავ შრება.
ყველაზე გავრცელებული საღებავები
ყველაზე ხშირად გამოყენებული საღებავები ეფუძნება ანილინის სხვადასხვა მჟავას მნიშვნელობებს (pH). საღებავების უმეტესობა არის ფხვნილი, რომლებიც განზავებულია ალკოჰოლში.
საღებავებს, რომლებშიც კათიონები შეღებვის აგენტია, ეწოდება ძირითადი (pH 7-ზე მეტი). მათი გამოყენება შესაძლებელია მიკროორგანიზმების წითლად (მაჯენტა, საფრანინი), იისფერი (მეთილის იისფერი, თიონინი), ლურჯი (მეთილენის ლურჯი), მწვანე (მალაქიტის მწვანე), ყავისფერი (ქრიზოიდინი) და შავი (ინდულინი) შეღებვისთვის.
საღებავებს, რომლებშიც შეღებვის აგენტები არიან ანიონები, ეწოდება მჟავე (pH 7-ზე ნაკლები). ისინი შეღებავს ნიმუშს წითლად (ეოზინი), ყვითლად (პიკრინი) ან შავად (ნიგროსინი).
არსებობს ნეიტრალური საღებავების ჯგუფი (მაგალითად, როდამინ B), სადაც ორივე კათიონები და ანიონები მოქმედებენ როგორც შეღებვის საშუალება.
კულტურა მკვდარი თუ ცოცხალი
შეღებვის მეთოდები იყოფა ორ ჯგუფად ტესტის ნიმუშის სიცოცხლის ფორმის მიხედვით.
- სასიცოცხლო (სიცოცხლის მანძილზე) შეღებვა. მიკროორგანიზმების თვისებების შესწავლის ეს მეთოდი გამოიყენება ცოცხალი ქსოვილების შესწავლისას, რაც შესაძლებელს ხდის მიკრობების სასიცოცხლო პროცესებზე დაკვირვებას. ამ შეღებვისთვის გამოიყენება დაბალი ტოქსიკურობის და მაღალი შეღწევადობის მქონე საღებავები.
- პოსტვიტალური შეღებვა. ეს არის მკვდარი ან მოკლული მიკროორგანიზმების შეღებვა. ბაქტერიების ტინქტური თვისებების წყალობით, მიკრობიოლოგები განსაზღვრავენ მათ სტრუქტურას. ყველაზე ფართოდ გამოიყენება სწორედ ეს შეღებვა.
გრამდადებითი და გრამუარყოფითი
სწორედ ბაქტერიების ეს მახასიათებლები გვხვდება სხვადასხვა მედიკამენტების ინსტრუქციებში. ბაქტერიების ტინქტორული თვისებების შესწავლის ეს მეთოდი ემყარება გენტიანი იისფერი საღებავისა და იოდის ფიქსაციის გამოყენებას. ეს არის დანიელი ექიმის ჰანს კრისტიან გრამის ტექნიკა, რომელმაც შემოგვთავაზა იგი 1884 წელს. ამ შეღებვის შედეგად ბაქტერიები იყოფა ორ ჯგუფად:
- გრამი (+) - გალურჯება(სტაფილოკოკები და სტრეპტოკოკები).
- გრამი (-) - შეღებვა ვარდისფერიდან წითელამდე (ენტერობაქტერიები, სალმონელა, E. coli).
სხვადასხვა შეღებვის შედეგები განპირობებულია ბაქტერიების კედლების სხვადასხვა ტინქტორული თვისებებით. ზოგიერთი ინფექციური დაავადების დიაგნოსტიკაში მაინც მთავარია გრამ შეღებვის მეთოდი.
სხვა შეღებვის ტექნიკა
დავახასიათოთ კიდევ რამდენიმე მეთოდი, რომელიც ფართოდ გამოიყენება ბაქტერიოლოგიაში.
- Ziehl-Nelson მეთოდი - განსაზღვრავს ბაქტერიების მჟავა წინააღმდეგობას. იგი განსაზღვრავს ტუბერკულოზისა და მიკობაქტერიოზის გამომწვევ აგენტებს.
- რომანოვსკი-გიემსას ტექნიკა - აციდოფილურ (ძმარმჟავა და რძემჟავა) ბაქტერიებს წითლად ღებავს და ბაზოფილურ (სპიროქეტები და პროტოზოა) ლურჯად.
- მოროზოვის ტექნიკა - აფერადებს ბაქტერიებს ყავისფრად და აჩენს მათ დროშებს.
სპორები ჩანს
ციელის ფუჩინის შეღებვა საშუალებას გაძლევთ ნახოთ ბაქტერიების სპორები. შეღებვის შემდეგ ვარდისფერი ფერის მქონე, ისინი აშკარად ჩანს ლურჯი ბაქტერიების ფონზე. ეს მეთოდი ასევე არის ბაქტერიოლოგიის ინსტრუმენტი და აქვს დიდი პრაქტიკული მნიშვნელობა.
