ბაქტერიების გაშენება: მეთოდები, პრინციპები, ნაბიჯები და პირობები

2024 ავტორი: Angel Austin | [email protected]. ბოლოს შეცვლილი: 2023-12-17 05:32

მიკროორგანიზმები ჩვენს ირგვლივ ბუნებაში ყველგან არიან: ნიადაგში, წყლის ობიექტებში, სხვადასხვა საგნების ზედაპირზე, ადამიანები და ცხოველები ბინადრობენ. ეს ყველაფერი შეიძლება გახდეს საკვების, წამლებისა და წარმოების ხაზების მიკრობული დაბინძურების წყარო. ბაქტერიების გაშენება აუცილებელია მათი თვისებების, საჭიროებებისა და მახასიათებლების შესასწავლად. ეს, თავის მხრივ, მნიშვნელოვანი ნაბიჯია სხვადასხვა მედიკამენტების შემუშავებაში, დაავადებათა ლაბორატორიულ დიაგნოზში, წარმოების რეაქტორების გამოთვლაში და მრავალი სხვა.

ზოგადი ცნებები

ბაქტერიების კულტივაცია მიკრობიოლოგიაში გულისხმობს მიკროორგანიზმების კულტივაციას, რომელიც ხორციელდება ლაბორატორიაში. თავის მხრივ, მიკრობებს, რომლებიც გაიზარდა შერჩეულ მკვებავ გარემოზე, კულტურას უწოდებენ. კულტურები შეიძლება იყოს შერეული, თუ ისინი წარმოიქმნება სხვადასხვა ტიპის მიკროორგანიზმების მიერ და სუფთა, თუ ისინი წარმოდგენილია მხოლოდ ერთი ტიპის ბაქტერიით.

თუ მკვებავიაგარემოში მოთავსებულია მხოლოდ ერთი უჯრედი და მისი გამრავლების შედეგად მიიღება ინდივიდთა ჯგუფი, შემდეგ მიკროორგანიზმების ამ ჯგუფს კლონი ეწოდება. როდესაც კლონი ვითარდება შეუიარაღებელი თვალით ხილული, ბაქტერიების ამ კოლექციას კოლონიას უწოდებენ.

როგორც წესი, სხვადასხვა წყაროდან იზოლირებული ბაქტერიების კულტივირება ხდება ერთმანეთისგან დამოუკიდებლად. მიკრობების თითოეულ ასეთ ცალკეულ ჯგუფს შტამი ეწოდება. ასე რომ, თუ სტაფილოკოკის ერთი ტიპი იზოლირებულია სამი წყაროსგან (ან ერთი და იმავე პროდუქტის სხვადასხვა ნაწილისგან, სხვადასხვა ადამიანებისგან), ისინი საუბრობენ ამ ტიპის სტაფილოკოკის სამ შტამზე.

ბაქტერიების ზრდის ფაქტორები

ეს მოიცავს სხვადასხვა ამინომჟავებს, ლიპიდებს, პურინის ფუძეებს და მიკროორგანიზმების განვითარებისთვის აუცილებელ სხვა ნაერთებს. ზოგიერთ მიკრობს შეუძლია დამოუკიდებლად წარმოქმნას მათთვის საჭირო ნივთიერებები, ზოგს კი უნდა მიიღოს ისინი მზა სახით. გარკვეული ზრდის ფაქტორებში მიკროორგანიზმების მოთხოვნილებების მიხედვით, ტარდება ბაქტერიების იდენტიფიკაცია და დიფერენცირება. ასევე, ეს პარამეტრი მნიშვნელოვანია ლაბორატორიული და ბიოტექნოლოგიური სამუშაოებისთვის მკვებავი გარემოს სწორად მომზადებისთვის:

• ამინომჟავები. ბაქტერიებს შეიძლება დასჭირდეთ ერთი კონკრეტული ამინომჟავა ან მჟავების ჯგუფი. ასე რომ, კლოსტრიდიას სჭირდება ლეიცინი და ტიროზინი, სტრეპტოკოკებს - ლეიცინი და არგინინი. მიკროორგანიზმებს, რომლებსაც გარედან ამინომჟავები სჭირდებათ, რომ გაიზარდონ, ეწოდებათ აუქსოტროფები.
• პურინის და პირიმიდინის ფუძეები, აგრეთვე მათი წარმოებულები (ადენინი, გუანინი და სხვა). ისინი ბევრის ზრდის მნიშვნელოვანი ფაქტორიასტრეპტოკოკის სახეობა.
• ვიტამინები. ისინი ბაქტერიების მიერ მოთხოვნილი კოფერმენტების ნაწილია. ასე რომ, ნიკოტინის მჟავა, ისევე როგორც მისი ამიდი, რომელიც არის NAD და NADP-ის ნაწილი, საჭიროა დიფტერიისა და შიგელა კორინებაქტერიებისთვის. თიამინი, როგორც პიროფოსფატის განუყოფელი ნაწილი, საჭიროა Staphylococcus aureus, პნევმოკოკი, ბრუცელა. პანტოტენის მჟავა, რომელიც არის CoA კოენზიმის ნაწილი, საჭიროა ტეტანუსის ბაცილებისა და სტრეპტოკოკის გარკვეული ტიპებისთვის. ციტოქრომები და, შესაბამისად, ფოლიუმის მჟავა, ჰემები და ბიოტინი, რომლებიც ქმნიან მათ, აუცილებელია Mycobacterium tuberculosis და Haemophilus influenzae-სთვის.

გარემოს მოთხოვნები

პირობები ბაქტერიების კულტივირებისთვის კულტურული მედიისთვის:

1. კვება. ისინი უნდა შეიცავდეს ნივთიერებებს, უფრო მეტიც, ადვილად ასათვისებელ ფორმაში, რომლებიც აუცილებელია მიკროორგანიზმების გამოსაკვებად და ენერგიის შესავსებად. მათ შორისაა ორგანოგენები და მინერალები. ზოგიერთ მიკროორგანიზმს დამატებით ესაჭიროება ვიტამინები და ამინომჟავები, რომელთა სინთეზი შეუძლებელია.
2. ოპტიმალური pH დონე. ის გავლენას ახდენს უჯრედის მემბრანის გამტარიანობაზე და, შესაბამისად, ბაქტერიის მიერ ნუტრიენტების შთანთქმის უნარზე. ყველაზე ხშირად, pH-ის მნიშვნელობა უნდა იყოს 7, 2-7, 4 დონეზე. მრავალი მიკროორგანიზმი თავისი სიცოცხლის განმავლობაში აწარმოებს პროდუქტებს მჟავე ან ტუტე რეაქციებით და იმისათვის, რომ არ შეიცვალოს მკვებავი გარემოს pH, ის ბუფერული უნდა იყოს.
3. იზოტონური. ოსმოსური წნევა ბაქტერიების გაშენების მკვებავ გარემოში უნდა ჰქონდეს იგივე მნიშვნელობები, რაცმიკრობული უჯრედების შიგნით. ჩვეულებრივ შეესაბამება 0,5% NaCl ხსნარს.
4. სტერილობა. ეს გამოწვეულია იმით, რომ უცხო ბაქტერიების გარეგნობა ამახინჯებს გაანალიზებული შტამის კვლევის შედეგებს.
5. ტენიანობის დონე. ამ ინდიკატორს, გარემოს კონსისტენციასთან ერთად, უნდა ჰქონდეს ოპტიმალური მახასიათებლები კონკრეტული ტიპის ბაქტერიისთვის.
6. რედოქს პოტენციალი (RH2). ის გვიჩვენებს ნივთიერებების თანაფარდობას, რომლებიც ჩუქნიან და იღებენ ელექტრონებს, აგრეთვე საკვები გარემოს ჟანგბადით გაჯერების დონეს. აერობებისა და ანაერობებისთვის, ბაქტერიების გაშენების პირობები გარკვეულწილად განსხვავდება ამ მაჩვენებლით. ანაერობული მიკროორგანიზმები საუკეთესოდ მრავლდებიან RH2 5-ზე დაბლა მნიშვნელობებზე და აერობული მიკროორგანიზმები მინიმუმ 10.
7. ერთგვაროვნება. მნიშვნელოვანია, რომ კულტურის საშუალება შეიცავდეს მისი ინდივიდუალური ინგრედიენტების მუდმივ რაოდენობას. გარდა ამისა, სასურველია გამჭვირვალე ხსნარები, რაც აადვილებს მოსავლის ზრდის მონიტორინგს ან დაბინძურების შემჩნევას.

კულტურული მედიის ტიპები

მიკროორგანიზმების ზრდისთვის კონკრეტული საშუალების არჩევაზე გავლენას ახდენს მრავალი ფაქტორი, რომელთა შორისაა მათი კვების მახასიათებლები და კვლევის მიზანი. საკვები ნივთიერებების კლასიფიკაციის ძირითადი მახასიათებლებია:

1. კომპონენტები. სუბსტრატის შესაქმნელად გამოყენებული საწყისი ნივთიერებების მიხედვით განასხვავებენ:

• ნატურალური, რომელიც მზადდება ცხოველური ან მცენარეული წარმოშობის პროდუქტებისგან (მაგ. ხორცი, რძე, ხილი) და შესაფერისია შერეული მოსაყვანად.კულტურები;
• ნახევრად სინთეზური, რომელშიც ძვირადღირებული ნატურალური საკვები იცვლება არასაკვებითი პროდუქტებით (მაგალითად, ძვლის ფქვილი, სისხლის შედედება) და რომლებიც ოპტიმალურია გარკვეული ტიპის ბაქტერიების გასაშენებლად ან მათი მეტაბოლური პროდუქტების იზოლირებისთვის. გარემო;
• სინთეზური, რომელიც მზადდება ზუსტი რაოდენობით ქიმიური ნაერთებისგან, აქვს ცნობილი მუდმივი შემადგენლობა და ადვილად რეპროდუცირებადია.

2. კონსისტენცია (სიმკვრივე). განასხვავეთ გარემო:

• თხევადი;
• მკვრივი;
• ნახევრადთხევადი.

ბოლო ორი მზადდება სპეციალური ხსნარებისგან ან თხევადი ნივთიერებებისგან, აგარ-აგარის ან ჟელატინის დამატებით, საჭირო სიმკვრივის შესაქმნელად. გარდა ამისა, ბაქტერიების ზრდის მჭიდრო გარემოა შედედებული სისხლის შრატი, კარტოფილი, სილიკა გელი, კარაგენანი.

3. ნაერთი. ამის საფუძველზე, გარემო არის:

• მარტივი, რომელთა სია მოკლეა: ხორცის პეპტონის ბულიონი (MBB), ჰოტინგერის ბულიონი და აგარი, ხორცის პეპტონ აგარი (MPA), საკვები ჟელატინი და პეპტონ წყალი.
• კომპლექსი, მომზადებული მარტივისგან სისხლის, შრატის, ნახშირწყლების და სხვა ნივთიერებების დამატებით.

4. დანიშვნა. განასხვავებენ შემდეგ საკვებ ნივთიერებებს:

• ძირითადი გამოიყენება მრავალი პათოგენური მიკრობის გასაშენებლად (ჩვეულებრივ მარტივი შემადგენლობით);
• სპეციალური გამოიყენება ბაქტერიების იზოლირებისთვის და კულტივირებისთვის, რომლებიც არ იზრდებიან მარტივ სუბსტრატებზე;
• სელექტიური (ისინი ასევე შერჩევითია) შესაფერისია კონკრეტული ტიპის ბაქტერიების იზოლირებისთვის და აფერხებს ასოცირებული მიკრობების ზრდას (შერჩევითობაშექმნილია მედიაში გარკვეული ნივთიერებების დამატებით, როგორიცაა ანტიბიოტიკები ან მარილები, ან pH-ის რეგულირებით);
• დიფერენციალური დიაგნოსტიკა საშუალებას იძლევა განასხვავოს ერთი ტიპის ბაქტერია მეორისგან ფერმენტული აქტივობის შეფასებით, მაგალითად, საშუალო;
• კონსერვანტები საჭიროა პირველადი ინოკულაციისთვის ნიმუშების შემდგომი ტრანსპორტირებისთვის, რადგან ისინი ხელს უშლიან მიკროორგანიზმების სიკვდილს, ასევე აფერხებენ სხვა ბაქტერიების ზრდას.

მედიის მომზადება

ანაერობული ბაქტერიების გაშენების ყველაზე მნიშვნელოვანი ნაბიჯი არის შესაფერისი საკვები გარემოს მომზადება. ოპტიმალური პარამეტრების შერჩევის შემდეგ გადადით შემდეგ ეტაპებზე:

• აწონა, კომპონენტების ნიმუშის არჩევით ანალიტიკურ ბალანსზე;
• დაშლა ხდება 70°C-მდე გაცხელებულ გამოხდილ წყალში და ფოსფატები, მიკრო და მაკრომარილები ცალკე იხსნება;
• ადუღეთ წყლის აბაზანაში ორი წუთის განმავლობაში;
• pH განსაზღვრა ინდიკატორის ქაღალდის ან პოტენციომეტრით;
• ფილტრაცია სველი ქსოვილის ან ქაღალდის ფილტრების მეშვეობით თხევადი, ასევე მდნარი მკვრივი მედიისთვის, და ბამბის მარლის ფილტრის მეშვეობით აგარის მედიისთვის;
• ჩამოსხმა შესრულებულია 3/4 ტევადობით;
• საშუალოდ დამოკიდებული სტერილიზაცია;
• სტერილურობის კონტროლი ტარდება თერმოსტატში ორი დღის განმავლობაში დაყენებით, შემდეგ დათვალიერებით;
• ქიმიური კონტროლი pH-ის და საჭიროების შემცველობის დასადგენადელემენტი;
• ბიოლოგიური კონტროლი საცდელი ინოკულაციის გზით.

მინის ჭურჭლისა და მედიის სტერილიზაცია

ბაქტერიების გაშენების ერთ-ერთი ძირითადი პრინციპია სტერილობა. უცხო მიკროორგანიზმების ზრდა-განვითარებამ შეიძლება გავლენა მოახდინოს მკვებავი გარემოს მახასიათებლებზე მისი ქიმიური შემადგენლობისა და pH-ის შეცვლით. სუფთა კულტურების ზრდის მთავარი პირობაა სტერილიზაცია. პრაქტიკაში, ეს ტერმინი ნიშნავს ზედაპირზე და სტერილიზებული ობიექტების მოცულობით სიცოცხლის აბსოლუტურად ყველა ფორმის განადგურების მეთოდებს. ჭურჭელი, გამოყენებული ინსტრუმენტები, მედია და კვლევის დროს გამოყენებული სხვა ნივთები სტერილიზებულია.

სტერილიზაციის ზოგიერთი ტიპი:

• ანთება. მარყუჟების და ნემსების სტერილიზაცია დათესვისთვის, შუშის სლაიდები, ზოგიერთი ინსტრუმენტი შეიძლება შესრულდეს სანთურის ან სულის ნათურის გამოყენებით.
• მდუღარე. ვარგისია შპრიცების, ნემსების, საკვების დასამუშავებლად, მაგრამ არ კლავს ბაქტერიების სპორებს.
• მშრალი სითბოს სტერილიზაცია. იგი ტარდება სპეციალურ საშრობ კარადაში და ვარგისია კოლბების, საცდელი მილების და სხვა ლაბორატორიული მინის დასამუშავებლად.
• ორთქლით სტერილიზაცია. ავტოკლავში განხორციელებული ეს მეთოდი ძალზე ეფექტურია. მაგრამ ის არ არის შესაფერისი ცილების ან სხვა ნაერთების შემცველი საკვები ნივთიერებებისთვის, რომლებიც იშლება მაღალ ტემპერატურაზე. უფრო ზომიერებას შეიძლება ეწოდოს ტინდალიზაცია. ტარდება კოხის ქვაბში და აერთიანებს სპორების აღმოცენებას მათ განადგურებასთან.
• პასტერიზაცია. იგი გამოიყენება მედიისთვის, რომელიც ცვლის თავის თვისებებს მოხარშვისას (მაგალითად, რძე, ღვინო, ლუდი), რომელსაც შეუძლიაგაათავისუფლეთ ისინი არასპორის შემცველი მიკროორგანიზმებისგან. დამუშავების ტემპერატურა არის მხოლოდ 50-60 ° C თხუთმეტიდან ოცდაათი წუთის განმავლობაში. ზოგიერთ შემთხვევაში გამოიყენება ცივი სტერილიზაცია, რომელიც ხორციელდება ფილტრების ან UV სხივების გამოყენებით.

ბაქტერიების გამრავლების პირობები

ბაქტერიების ზრდა და განვითარება შესაძლებელია მხოლოდ გარკვეული ფაქტორებით და თითოეული მათგანის მნიშვნელობებით:

1. ტემპერატურა. არსებობს ბაქტერიების სამი ჯგუფი, რომლებიც განსხვავდება ტემპერატურის უპირატესობებში:

• თერმოფილები, ანუ სითბოს მოყვარული მიკრობები, იზრდებიან 45-90°C-ზე, რაც ნიშნავს რომ ისინი არ მრავლდებიან ადამიანისა და ცხოველის ორგანიზმებში;
• ფსიქროფილები, ანუ სიცივის მოყვარული მიკროორგანიზმები, უპირატესობას ანიჭებენ ტემპერატურას 5-15 °C დიაპაზონში და იზრდებიან ცივ სათავსოებში;
• მეზოფილები, ვითარდება 25-37°C ტემპერატურაზე, მათ შორისაა ბაქტერიების უმეტესი ნაწილი.

2. Მსუბუქი. ეს არის ფოტოტროფული ბაქტერიების გაშენების თავისებურება, რადგან ისინი ახორციელებენ ფოტოსინთეზის პროცესს. მაგრამ მიკრობების უმეტესობისთვის განათება არ არის წინაპირობა. და პირიქითაც კი, მზის ულტრაიისფერს შეუძლია შეაჩეროს მათი განვითარება.

3. წყალი. ყველა მიკროორგანიზმს სჭირდება წყალი ხელმისაწვდომი (თხევადი) ფორმით. სწორედ ამიტომ გაყინულ საკვებს აქვს ბაქტერიების გამრავლება.

4. გარემოს მჟავიანობა. ბაქტერიების გაშენების ეს პრინციპი უკვე დეტალურად იყო განხილული ზემოთ.

5. აერაცია. ჟანგბადი, როგორც ქიმიური ელემენტი, არის წყლის განუყოფელი ნაწილი და ნაერთების მნიშვნელოვანი რაოდენობა, რომლებიც გამოიყენებამიკროორგანიზმების გაშენება. აირისებრი ჟანგბადი ასევე შეიძლება შეიცავდეს წყალს და სხვა სითხეებს გახსნილი სახით. ბაქტერიების მნიშვნელოვან ნაწილს სჭირდება ჟანგბადის მოლეკულების მუდმივი მიწოდება. მაგრამ რიგი მიკროორგანიზმებისთვის ეს არასაჭიროა, ან, უარესი, აირისებრი ჟანგბადი მათთვის ტოქსიკურია, რადგან მათ არ აქვთ კატალაზა და პეროქსიდაზა, რომლებიც ანადგურებენ ტოქსიკურ რესპირატორულ პროდუქტებს. ამიტომ, ანაერობული ბაქტერიების გაშენების ყველაზე მნიშვნელოვანი ნაბიჯი არის O₂ მოლეკულების მოცილება მკვებავი გარემოდან.

6. მიკროორგანიზმების გაშენება. აერობული და ანაერობული ბაქტერიების გაშენება ხდება გარემოს სხვადასხვა ფენებში და სხვადასხვა რეჟიმში.

აერობული მიკროორგანიზმების გაშენება

აერობული ბაქტერიების გაშენებისთვის საჭიროა მოლეკულური ჟანგბადი. აერობების სუფთა კულტურების მისაღებად, რომლებიც წარმატებით გამოიყენება მედიცინასა და კვების მრეწველობაში, გამოიყენება შემდეგი მეთოდები:

• ზედაპირი იზრდება მკვრივ გარემოზე ან თხევად გარემოში (მათი თხელი ფენა), როდესაც ჟანგბადი პირდაპირ ჰაერიდან მოდის;
• ღრმა კულტივაცია თხევად გარემოში, როდესაც მათში გახსნილი ჟანგბადის რაოდენობის ზრდა მიიღწევა მუდმივი აერაციით.

ანაერობული მიკროორგანიზმების გაშენება

ამ ტიპის ბაქტერიების გაშენების ძირითადი პრინციპია მათი მინიმალური შეხება ატმოსფერულ ჟანგბადთან. მათი ზრდის პირობების უზრუნველყოფა ბევრად უფრო რთულია, ვიდრე აერობებისთვის. შემდეგი მეთოდები გამოიყენება ანაერობების იზოლირებისთვის მოლეკულური O₂:

1. ფიზიკური. ანაერობული ბაქტერიების გაშენების ეს მეთოდი მცირდება მათ გაშენებამდე სპეციალურ ვაკუუმ აპარატში - მიკროანაეროსტატი. მასში ჰაერი იცვლება აზოტის სპეციალური აირის ნარევით 10% წყალბადის და 5% ნახშირორჟანგის დამატებით.
2. ქიმიური. ეს მოიცავს: შთამნთქმელი აგენტების გამოყენებას (მაგ. Fe, Na₂S₂O₄, CuCl) ან შემცირების აგენტები (როგორიცაა ასკორბინის მჟავა).
3. ბიოლოგიური. საქმე ეხება აერობებისა და ანაერობების ერთობლივ კულტივაციას დახურულ სისტემაში. ბაქტერიების გაშენების ეს მეთოდი გულისხმობს პეტრის ჭურჭლის ერთი ნახევრის დათესვას ზოგიერთი აერობული ბაქტერიით, ხოლო მეორე ნახევრის შესწავლილ ანაერობთან ერთად. მისი განვითარება დაიწყება იმ მომენტში, როდესაც მთელი ჟანგბადი დაიხარჯება.

დათესვის შემდეგი მეთოდები შესაფერისია ანაერობული ბაქტერიების გასაშენებლად:

• ზედაპირულ ფენაში;
• სტერილური პარაფინით სავსე ზედაპირულ ფენაში;
• სქელ მკვებავ გარემოში;
• ბლანტი მედიის ღრმა ფენებში.

სუფთა კულტურის მიღება

მიკრობიოლოგები, როგორც წესი, მუშაობენ ნიმუშებით, რომლებიც დასახლებულია სხვადასხვა ტიპის მიკრობებით. ამასთან, მიკროორგანიზმების (ოჯახი, გვარი, სახეობა) სისტემატური პოზიციის დასადგენად, ასევე მათი მახასიათებლების შესასწავლად აუცილებელია მათი იზოლირება და სუფთა კულტურის გაზრდა. მათ დიდი მნიშვნელობა აქვთ ბევრ კვების მრეწველობაში, მაგალითად, ყველის, პურის, კვასის, ღვინის და ა.შ. რძემჟავა ბაქტერიების გაშენება შესაძლებელს ხდის მიიღოთაუცილებელი კომპონენტი ფერმენტირებული რძის პროდუქტების, ცომის, კაკაოს, სილოსის და პლასტმასის წარმოებისთვის.

სუფთა კულტურის მკვრივ გარემოში გამოყოფის მეთოდი ეფუძნება მიკროორგანიზმების უჯრედების მექანიკურ გამოყოფას მათი შემდგომი იზოლირებული კულტივირებით. ნიმუში გადააქვთ სტერილურ მოცულობაში წყალში ან ფიზიოლოგიურ ხსნარში (მოცულობით 10-100 მლ) და შემდეგ შეურიეთ ორი წუთის განმავლობაში. შესასწავლი მასალის (მაგალითად, ძეხვეული ან ყველი) სისქეში მდებარე მიკროორგანიზმების ამოღების მიზნით, ჯერ ტარდება ნიმუშის ნაჭრების სტერილური ხელსაწყოებით ქვიშის შეზელა. მასალა, რომელმაც გაიარა წინასწარი მომზადება, წონით 1 გ ან 1 მლ მოცულობით, იხსნება სტერილური წყლით 10, 100, 1000 და ა.შ. არჩეულია განზავების ხარისხი, რომელიც იძლევა უჯრედების კონცენტრაციას, რომელიც შეესაბამება მეთოდის შესაძლებლობებს.

მიკროორგანიზმების შემდგომი გაშენება არის მკვებავი გარემოს მომზადება. ჩვეულებრივ არჩეულია მკვრივი საშუალო (MPA). ჯერ დნება და გაცივდება 45-50 °C-მდე და მხოლოდ ამის შემდეგ ასხამენ რამდენიმე პეტრის ჭურჭელში (სამ-ხუთ ცალი), რომლის ფსკერზე დევს სხვადასხვა კონცენტრაციის საცდელი ნივთიერების ტამპონები. შემდეგი, ხორციელდება ჯერ კიდევ არ გაყინული საკვები გარემოსა და მასში შეყვანილი მასალის შერევა. ასე ფიქსირდება უჯრედები სუბსტრატის მოცულობის სხვადასხვა წერტილში.

შემდეგ, პეტრის ჭურჭელი მოთავსებულია თერმოსტატში 2 დღის განმავლობაში 22 °C ტემპერატურაზე. ამ დროის განმავლობაში უჯრედები იმდენად მრავლდება, რომ თითოეული უჯრედის მიერ წარმოქმნილი კოლონია შეუიარაღებელი თვალით ხილული ხდება. თითოეული მათგანი არის ბაქტერიების ტიპის სუფთა კულტურა, რომლის უჯრედებიდანაც იგივარდი.

შემდეგ, პეტრის კერძებიდან მიკროორგანიზმები სუბკულტივირებულია ცალკე საცდელ მილებში, რომლებიც სავსეა მკვებავი გარემოთი. ამ გზით, სუფთა კულტურები იზოლირებულია შერეული ნიმუშიდან. ეს მეთოდი ატარებს მისი შემქმნელის სახელს - R. Koch. მას ასევე საყოველთაოდ უწოდებენ თასის მეთოდს, ან დამღუპველ თესვას. სხვადასხვა ტიპის ბაქტერიების სუფთა კულტურების მიღების შემდეგ განისაზღვრება მათი ფორმა, სპორები და ოჯახები.

ყველა სამუშაო უნდა ჩატარდეს ასეპსისის პრინციპების შესაბამისად. მიკროორგანიზმების ნაადრევი განვითარების თავიდან ასაცილებლად, კვლევა უნდა ჩატარდეს სინჯის აღებისთანავე. ონკანის წყალი ანალიზდება პირველი ნაწილის დრენაჟის შემდეგ, რადგან ისინი შეიძლება შეიცავდეს მილებში და ონკანებში დაგროვილ მიკრობებს. ხილის, კენკრის და ბოსტნეულის მიკროფლორა ძირითადად ზედაპირზეა (ქერქი), ამიტომ მისგან რეცხვა ხდება. ამისათვის ნაყოფი მოათავსეთ სტერილურ ჭურჭელში და შეავსეთ საჭირო რაოდენობის წყლით. შემდეგ საკმაოდ ენერგიულად რხევენ და წყალს ასხამენ სხვა ჭურჭელში. ნაჭრის ნაწარმიდან ნათესები ასევე მიიღება ტამპონებით, მაგრამ წინასწარ იჭრება მოცემული ზომის ნაჭრები.